MTB staining method

أهمية التلوين الآلي للمتفطرات السلية (عصيات السل) Mycobacterium tuberculosis (MTB)

إن السبب الرئيسي لمرض السل هو المتفطرة السلية Mycobacterium tuberculosis (MTB)، وهي عصية هوائية غير متحركة. تنقسم هذه البكتيريا مرة كل 16 إلى 20 ساعة، وهو معدل بطيء للغاية مقارنة بالبكتيريا الأخرى، التي تنقسم عادة في أقل من ساعة. غشاءها الخارجي مزدوج وجدارها الخلوي ويتميز بالمحتوى الدهني العالي،ولايمكن تلوينها بتلوين غرام حيث أنها لا تحتفظ بالصبغة نتيجة المحتوى الدهني العالي، فهي تلون بطرائق أخرى أكثرها شيوعاً طريقة تسل نلسن Ziehl-Neelsen.

والسل مرض معدٍ ينتشر عن طريق الهواء عبر السبيل التنفسي. ويشكّل الأشخاص المصابون بالسل الرئوي مصدراً للعدوى. من خلال مفرزاتهم التنفسية.

ويمكن تحديد عصيات السل في المخبر من خلال تلوين عينات القشع Sputum، وبما أن MTB تحتفظ ببقع معينة حتى بعد معالجتها بمحلول حمضي، فإنها تصنف على أنها عصية مقاومة للحمض، لذلك يتم تلوينها بواسطة طريقة تسل نلسن.

تلوين تسل-نلسن Ziehl–Neelsen

يُستخدم هذا التلوين في علم البكتيريا لمعرفة وتحديد الكائنات الحيّة (المتعضيات) المتحملة للحمض، والتي هي بالأساس فصيلة المتفطّرات. حيث أن المتفطّرات السلية هي المجموعة الأهم لأنها المسؤولة عن مرض السلّ. وتحتوي الكائنات المقاومة للحمض، مثل المتفطّرات، على كميات كبيرة من المواد الدهنية داخل جدار الخلية تدعى الحموض الميكولية. هذه الحموض لا تتفاعل مع طرق التلوين الاعتيادية مثل صبغة غرام.

آلية التلوين اليدوي:

1- الكاربول فوكسين المركز (Basic Fuchin): كصبغة اساسية حيث يصبغ الكاربول فوكسين جميع الخلايا، ويتم التسخين من 60 إلى 80 درجة مئوية تقريبا باستخدام اللهب بحيث تتبخر الصبغة دون أن تغلي أوتجف ثم تغسل بالماء الجاري بلطف .

2- Acid Alchol: نغمر الشريحة بمزيل اللون باستخدام حمض الكبريتيك 20% ثم الكحول، حيث يزول اللون فقط من الجراثيم غير المقاومة للحمض لأنها لا تملك طبقة دهون سميكة وشمعية مثل الجراثيم المقاومة للحمض، وهذه الخطوة تختلف مدتها علي حسب سمك العينة على الشريحة حيث تحتاج نصف دقيقة تقريباً. ثم تغسل بالماء الجاري كذلك.

3- Methylin Blue: وتعمل كصبغة مميزة (مباينة) control stain حيث تُصبغ البكتيريا غير المقاومة للحمض وتصبح زرقاء اللون تحت المجهر، أما البكتيريا المقاومة للحمض فتحافظ على لون الكاربول فوكسين وتظهر باللون الأحمر، وتبدو عصيات السل ملونة باللون الاحمر وكل الاشياء علي الشريحة باللون الازرق حيث يسهل التعرف عليها.

وجدير بالذكر ان تلوين تسل نلسن اليدوي سابقة الذكر يُعرض العاملين في المخبر إلى العوامل الممرضة من جهة، وإلى الملونات المسرطنة من جهة أخرى، كما يسبب هدراً كبيراً في المواد الملونة.

وتفادياً لذلك، فإن الحل الأنسب هو استخدام التلوين الآلي بواسطة جهاز الملون الآليAuto Stainer α-Dye acid  المصنع في شركة DL، حيث لایؤدي الجھاز الى تلوث أو نقل للعدوى، كما یقوم بتلوین 8 شرائح معاً خلال 5 دقائق، إضافة إلى أنه اقتصادي حیث یغني عن ھدر المواد المستخدمة والذي یحصل عادة یدویاً فهو یستھلك 600 میكرولتر من الملون وبالتالي لا یوجد أخطاء مقارنة بالتلوین الیدوي، كما أنه قادر على الغسل الذاتي مما يؤمن حماية العاملين.

وذلك للوصول إلى النتائج المرجوة من الكفاءة العالية ودقة النتائج المخبرية. إضافة إلى حماية العاملين من العوامل الممرضة والمسرطنة، والتي هي أهم معايير ضبط جودة المخابر الطبية حسب منظمة الصحة العالمية WHO.

References;

 Morello, Josephine A., Paul A. Granato, Marion E. Wilson, and Verna Morton. Laboratory Manual and Workbook in Microbiology: Applications to Patient Care. 10th ed. Boston: McGraw-Hill Higher Education, 2006. Print.

 ‎Dolin, [edited by] Gerald L. Mandell, John E. Bennett, Raphael (2010). Mandell, Douglas, and Bennett's principles and practice of infectious diseases (7th ed.). Philadelphia, PA: Churchill Livingstone/Elsevier. pp. Chapter 250. 

WHO Quality Control of Medical Laboratories.

Southwick F (10 December 2007). "Chapter 4: Pulmonary Infections". Infectious Diseases: A Clinical Short Course, 2nd ed. McGraw-Hill Medical Publishing Division. pp. 104, 313–4. 

Jindal, editor-in-chief SK (2011). Textbook of Pulmonary and Critical Care Medicine. New Delhi: Jaypee Brothers Medical Publishers. p. 525. ISBN 978-93-5025-073-0. Archived from the original on 6 September 2015.

Niederweis M, Danilchanka O, Huff J, Hoffmann C, Engelhardt H (March 2010). 

Madison BM (May 2001). "Application of stains in clinical microbiology". Biotechnic & Histochemistry. 76 (3): 119–25. 

Parish T, Stoker NG (December 1999). "Mycobacteria: bugs and bugbears (two steps forward and one step back)". Molecular Biotechnology. 13 (3): 191–200. 

Medical Laboratory Science: Theory and Practice. New Delhi: Tata McGraw-Hill. 2000. p. 473. ISBN 978-0-07-463223-9. Archivedfrom the original on 6 September 2015.

Pike RM. Laboratory-associated infections: summary and analysis of 3921 cases. Health Lab Sci. 1976 Apr;13(2):105–114.